CÁCH PHA MÔI TRƯỜNG MS

CÁCH PHA MÔI TRƯỜNG MS

Để pha môi trường MS hay môi trường nuôi cấy mô thực vật thì thành phần bao gồm như sau: Vi lượng, đa lượng, Fe-EDTA, Vitamin.

Môi trường MS là một loại môi trường rất giàu chất dinh dưỡng, được ứng dụng nuôi cấy trên rất nhiều loại cây. Ngoài ra cũng có một số loại môi trường nuôi cấy khác như môi trường B5( Gamborg), môi trường này ứng dụng cho loại cây có nhu cầu chất dinh dưỡng vừa phải. Ngoài ra còn có các môi trường nghèo chất dinh dưỡng như: White, Knop. A. Danh sách hóa chất cần sử dụng cho nuôi cấy mô thực vật- môi trường MS - Thành Phần đa lượng: +Ammonium nitrate (NH4NO3) 1,650 mg/l +Calcium chloride (CaCl2 · 2H2O) 440 mg/l +Magnesium sulphate (MgSO4 · 7H2O) 370 mg/l +Potassium phosphate (KH2PO4) 170 mg/l +Potassium nitrate (KNO3) 1,900 mg/l - Thành phần vi lượng +Boric acid (H3BO3) 6.2 mg/l +Cobalt chloride (CoCl2 · 6H2O) 0.025 mg/l +Cupric sulphate (CuSO4 · 5H2O) 0.025 mg/l +Ferrous sulphate (FeSO4 · 7H2O) 27.8 mg/l +Manganese sulphate (MnSO4 · 4H2O) 22.3 mg/l +Potassium iodide (KI) 0.83 mg/l +Sodium molybdate (Na2MoO4 · 2H2O) 0.25 mg/l +Zinc sulphate (ZnSO4·7H2O) 8.6 mg/l +Na2EDTA · 2H2O 37.2 mg/l - Vitamins và chất hữu cơ i-Inositol 100 mg/l Niacin 0.5 mg/l Pyridoxine · HCl 0.5 mg/l Thiamine · HCl 0.1 mg/l Glycine 2 mg/l Edamin (tùy chọn) 1 g/l B. Danh sách vật tư thiết bị dùng cho nuôi cấy mô thực vật STTTên thiết bịĐơn vị 1Bình định mức 100mlcái 2Bình định mức 500mlCái 3Ống đong 100mlCái 4Ống đong 500mlCái 5Đũa khuấyCái 6Bình màu 200mlCái 7Quả bóp cao suCái 8Bể ổn nhiệtCái 9Cốc 100mlCái 10Cốc 200mlCái 11Pipett 1ml, 5ml, 10mlCái 12Bình định mức 250mlCái 13Nồi hấpCái 14Tủ cấyCái 15Máy đo PHCái 16Bình tam giác 250mlCái 17Que cấy, kẹp, kéoCái 18Hộp nhiệt khử trùngCái 19Máy lắcCái 20Cân phân tích, cân kỹ thuậtCái C. Cách pha stock môi trường MS: Stock đa lượng, stock vi lượng, stock Fe-EDTA, stock vitamin - Pha khoáng đa lượng nồng độ 20X Chúng ta nên dùng cân phân tích để cân chính xác hàm lượng các loại muối. Dùng ống đong, đong trước 400ml nước cất 2 lần vào beaker 1000ml( hay còn gọi là cốc đốt thấp thành). Lần lượt cho các muối vào theo thứ tự bên dưới bảng. Lưu ý mỗi lần cho một khoáng vào phải bảo đảm được khuấy ta( có thể dùng máy khuấy từ), sau mỗi khoáng ta thêm 100ml nước cất 2 lần( theo phương pháp thể tích tăng dần). CaCl2.2H2O phản ứng kết tủa với MgSO4.7H2O do đó, 2 chất này nên pha tách rời theo thứ tự dưới bảng. Tất cả muối cho vào beaker và bổ sung thêm nước cất cho đủ 1000ml. Như vậy ta có stock dung dịch khoáng đa lượng 20X. Dung dịch nên để trong chai màu, bảo quản ở 4-10oC, mỗi lần lấy 50ml cho 1 lit môi trường nuôi cấy. Tên hóa chấtNồng độ môi trường nuôi cấy(mg/lit)Nồng độ stock 20X(mg/L) MgSO4.7H2O3707,400 KH2PO41703,400 KNO31,90038,000 NH4NO31,65033,000 CaCl2.2H2O4408,800 - Pha stock dung dịch khoáng vi lượng 1000X Vì sao chúng ta pha tới 1000X? Lý do là hàm lượng một số khoáng vi lượng rất nhỏ. Do đó chúng ta lấy với số lượng lớn để pha môi trường chính xác hơn. Tên hóa chấtNồng độ môi trường nuôi cấy(mg/lit)Nồng độ stock 1000X(mg/L) H3PO36,26200 MnSO4.4H2O22,322,300 ZnSO4.4H2O8,68,600 Na2MoO4.2H2O0,25250 KI0,83830 CuSO4.5H2O0,02525 CoCl2.6H2O0,02525 - Pha dung dịch stock Fe-EDTA 200X Sắt là yếu tố không kém quan trọng đối với thực vật. Tuy nhiên, liều lượng bổ sung rất nhỏ nhưng phải liên tục. Do đó, người ta thường cung cấp sắt cho cây dưới dạng hợp chất Fe-EDTA. Hợp chất Fe-EDTA được hình thành dưới sự tác dụng của Fe và EDTA dưới nhiệt độ. Khi cây có nhu cầu thì sắt sẽ được phóng thích đáp ứng cho cây. Tên hóa chấtNồng độ môi trường nuôi cấy(mg/L)Nồng độ môi stock 200X(mg/L) FeSO4. 7H2O27,85,560 Na2EDTA37,37,460 Cách pha như sau: Dùng 2 beaker 500ml và 100ml. Cho 400ml nước cất vào mỗi cốc, đun nóng lên tới 80oC. Tiếp đến cho 5,56g FeSO4.7H2O vào cốc 500ml, khuấy cho tan. Sau đó cho 7,46g Na2EDTA vào cốc 1000ml, khuấy tan. Bước quan trọng, đổ từ từ dung dịch FeSO4.7H2O vào cốc có chưa Na2EDTA. Cuối cùng bổ sung cho đủ 1000ml nước. Lưu ý, bảo quản ởở 4-10oC, mỗi lần lấy 5ml để pha cho 1 lit môi trường nuôi cấy.

: 26/11/2015 : 3326
Print